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转基因棉花Mon1445和Mon531品系特异性的定性定量PCR检测

来源: 发布时间:2017-11-25 07:16:00 浏览次数: 【字体:

杨立桃 潘爱虎 章可为 尹长松 钱炳俊 陈建秀 黄诚 张大兵

转基因棉花Mon1445和Mon531品系特异性的定性定量PCR检测

《Transgenic Research转基因研究

2005

14:817-831.

摘要:转基因棉花Mon1445和Mon531品系特异性的定性定量PCR检测
杨立桃1,2)  潘爱虎3)  章可为3)  尹长松3) 钱炳俊1)  陈建秀2)   黄诚2)  张大兵1,3)﹡
(1)上海交通大学生命科学与技术学院,上海 200240; 
2) 南京大学生命科学院,南京 210093;
3) 上海市农业科学院农业生物技术研究中心,上海市农业遗传育种重点实验室,上海 201106)
摘要:基于重组体和两种转基因棉花品系:耐除草剂棉花Mon1445和抗虫棉花Mon531的基因组DNA之间的连接区DNA序列,设计品系特异性引物和探针,建立了定性、定量PCR检测方法检测两种转基因棉花。在定性PCR检测中,建立了普通的和多重PCR检测体系,鉴别其他转基因棉花和作物中的Mon1445和Mon531。在一个反应中,用100 ng DNA作为模板,普通PCR 对Mon144和Mon531的检测限为0.05%,多重PCR的检测限为0.1%。为了进一步应用TaqMan实时PCR检测体系定量检测Mon1445和Mon531,构建了质粒pMD-ECS作为标准分子,它含有Mon1445, Mon531和棉花内标基因的定量扩增片断。利用质粒pMD-ECS做参照分子,Mon1445和Mon531的品系特异性PCR检测体系的定量检测限为10拷贝,每个反应用100 ngDNA作模板,定量范围为0.03 到100%。此后,使用建立的实时PCR体系定量检测5个棉花混合样品,分别含有0,0.5, 0.9, 3 和 5%Mon1445 或Mon531,用此评估建立的实时PCR体系的准确度和精确度。准确度表明对于检测的Mon1445棉花样品偏差变化范围为1.33 到 8.89%,对于Mon531为2.67 到 6.80%。精密度表明对于检测的Mon1445棉花相对标准偏差变化从1.13 到 30.00%,对于Mon531相对标准偏差变化从1.27 到 24.68%,相对标准偏差的范围同其他实验室的的结果(25%)相似。综合以上的结果,我们相信建立的Mon1445和Mon531品系特异性定性和定量PCR体系是合格的、适合于转基因棉花的鉴定和定量。
关键词:转基因棉花,Mon1445,Mon531,复合PCR,标准分子,TaqMan实时PCR

Qualitative and quantitative PCR methods for event-specific detection
of genetically modified cotton Mon1445 and Mon531
Litao Yang1,2, Aihu Pan3, Kewei Zhang3, Changsong Yin3, Bingjun Qian1, Jianxiu Chen2,

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