摘要：转基因棉花Mon1445和Mon531品系特异性的定性定量PCR检测
杨立桃1，2)  潘爱虎3)  章可为3)  尹长松3) 钱炳俊1)  陈建秀2)   黄诚2)  张大兵1，3)﹡
（1）上海交通大学生命科学与技术学院，上海 200240； 
2) 南京大学生命科学院，南京 210093；
3) 上海市农业科学院农业生物技术研究中心,上海市农业遗传育种重点实验室，上海 201106）
摘要：基于重组体和两种转基因棉花品系：耐除草剂棉花Mon1445和抗虫棉花Mon531的基因组DNA之间的连接区DNA序列，设计品系特异性引物和探针，建立了定性、定量PCR检测方法检测两种转基因棉花。在定性PCR检测中，建立了普通的和多重PCR检测体系，鉴别其他转基因棉花和作物中的Mon1445和Mon531。在一个反应中，用100 ng DNA作为模板，普通PCR 对Mon144和Mon531的检测限为0.05%，多重PCR的检测限为0.1%。为了进一步应用TaqMan实时PCR检测体系定量检测Mon1445和Mon531，构建了质粒pMD-ECS作为标准分子，它含有Mon1445, Mon531和棉花内标基因的定量扩增片断。利用质粒pMD-ECS做参照分子，Mon1445和Mon531的品系特异性PCR检测体系的定量检测限为10拷贝，每个反应用100 ngDNA作模板，定量范围为0.03 到100%。此后，使用建立的实时PCR体系定量检测5个棉花混合样品，分别含有0,0.5, 0.9, 3 和 5%Mon1445 或Mon531，用此评估建立的实时PCR体系的准确度和精确度。准确度表明对于检测的Mon1445棉花样品偏差变化范围为1.33 到 8.89%，对于Mon531为2.67 到 6.80%。精密度表明对于检测的Mon1445棉花相对标准偏差变化从1.13 到 30.00%，对于Mon531相对标准偏差变化从1.27 到 24.68%，相对标准偏差的范围同其他实验室的的结果（25%）相似。综合以上的结果，我们相信建立的Mon1445和Mon531品系特异性定性和定量PCR体系是合格的、适合于转基因棉花的鉴定和定量。
关键词：转基因棉花，Mon1445，Mon531，复合PCR，标准分子，TaqMan实时PCR

Qualitative and quantitative PCR methods for event-specific detection
of genetically modified cotton Mon1445 and Mon531
Litao Yang1,2, Aihu Pan3, Kewei Zhang3, Changsong Yin3, Bingjun Qian1, Jianxiu Chen2,